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實(shí)驗(yàn)室“標(biāo)配”擬南芥研磨提取核酸引發(fā)的討論
點(diǎn)擊：16721 添加時(shí)間：2016-12-14 14:10:00 信息來(lái)源：DHS
實(shí)驗(yàn)室“標(biāo)配”擬南芥研磨提取核酸引發(fā)的討論
給大家分享的內(nèi)容是——擬南芥研磨提取核酸。
那接下來(lái)，就讓我們先睹為快，看看這個(gè)案例的情況。
那接下來(lái)，就讓我們先睹為快，看看這個(gè)案例的情況。
實(shí)驗(yàn)：擬南芥研磨提取核酸
實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：某大學(xué)
實(shí)驗(yàn)樣品：擬南芥
實(shí)驗(yàn)儀器：TL2020高通量組織研磨儀
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、在2ml圓底離心管底放入擬南芥樣品，每管樣品量不超過(guò)單管體積的1/3；
2、在離心管中加入3mm硬質(zhì)不銹鋼研磨珠2顆；
3、接下來(lái)的步驟根據(jù)提取目的不同操作略有不同，以表格形式展現(xiàn)如下：
此外，以下我們邀請(qǐng)了提供此案例的嘉賓老師和一些用戶朋友進(jìn)行了分享和討論。
嘉賓：大家好，之前跟大家分享過(guò)幾期多是動(dòng)物組織，這次我們分享一次植物組織的案例。植物組織的特點(diǎn)是一般樣品量比較大，老師們多會(huì)采用2ml的離心管，每次用適配器的話就是2mlx2X56的研磨量，基本都可以滿足實(shí)驗(yàn)的需求了。
嘉賓：之所以想跟大家分享這次的案例，是因?yàn)檫@位老師采用的組織研磨儀研磨方式比較系統(tǒng)全面一些，用組織研磨儀濕磨和冷凍研磨都有。濕磨他通常是在提取DNA的時(shí)候使用，冷凍研磨多用于提取RNA，不知道群里各位老師是否也是采用類(lèi)似的研磨方式。
嘉賓：在這個(gè)案例中，我們看到樣品是擬南芥，像其他的葉片類(lèi)組織，比如黃瓜、苜蓿、水稻等，都可以采用同樣的設(shè)置進(jìn)行研磨。
用戶：DNA和rna的提取條件有什么區(qū)別？
嘉賓：RNA的話我們知道比較會(huì)容易降解，所以會(huì)需要浸泡液氮，以及將用具進(jìn)行滅菌，而且盡可能在保證快速短時(shí)間的研磨條件下進(jìn)行。
用戶：做過(guò)生菜。
嘉賓：您可以跟我們分享下您提生菜葉片的條件嗎？是提取RNA還是DNA呢？
用戶：液氮手工磨，DNA。上學(xué)時(shí)，全是手工配，累死。
嘉賓：還好生菜應(yīng)該是屬于容易研磨的類(lèi)型吧。
用戶：玻璃研磨器都沒(méi)法用，只能陶瓷的，玻璃直接炸。
嘉賓：您可以用一用我們的組織研磨儀。
用戶：現(xiàn)在不做了。
嘉賓：提DNA的話用自動(dòng)組織研磨儀就可以濕磨，也方便后期離心，不用擔(dān)心轉(zhuǎn)移帶來(lái)的污染了。不做了就解放雙手了。
嘉賓：一般來(lái)說(shuō)，如果是較有任性的植物組織，比如水稻莖等，對(duì)樣品的進(jìn)入量大小要求會(huì)略嚴(yán)格。
用戶：抽提液離心管還不能用滅菌的。
用戶：禾本科的植物相對(duì)難磨。
嘉賓：如果能盡量將樣品本身剪成1cm長(zhǎng)左右的小段會(huì)對(duì)研磨有大幫助。
用戶：恩，所以用液氮。
嘉賓：是的，您是不是做過(guò)類(lèi)似的植物樣本？
用戶：對(duì)，我們實(shí)驗(yàn)室只做植物樣品。
嘉賓：如果是研磨剛說(shuō)的韌性含纖維的植物樣本，除了剛老師說(shuō)的用液氮，也可以同時(shí)采用1大1小的鋼珠來(lái)研磨。
嘉賓：那您這邊經(jīng)驗(yàn)應(yīng)該比較豐富的，您一般做的都有哪些樣品呢？
用戶：我們這一般的植物樣品都有，豆類(lèi)，玉米，油菜牧草類(lèi)。
嘉賓：樣品種類(lèi)確實(shí)很多啊。
用戶：我們是植物實(shí)驗(yàn)室。
嘉賓：一般來(lái)說(shuō)，您覺(jué)得哪種比較難磨呢？
用戶：我們好多樣品是直接研磨種子，豆類(lèi)、油菜、苜蓿種子不好磨。
用戶：組織研磨儀研磨珠用的什么材質(zhì)的？
用戶：我們的組織研磨儀用的是萊馳的mm400，用的是大的不銹鋼珠。
嘉賓：用的是不銹鋼的，3mm的鋼珠。
用戶：擬南芥是什么東東？
嘉賓：實(shí)驗(yàn)用的擬南芥看著還挺可愛(ài)的，長(zhǎng)在培養(yǎng)皿里，小小的一整片。
用戶：植物研究的模式植物。
用戶：我還以為是藥材呢。
嘉賓：種子的話，用組織研磨儀您一般會(huì)間歇多次研磨嗎？還是說(shuō)一次性研磨幾分鐘？
用戶：玉米及其他相對(duì)容易磨的，一次性一分鐘基本沒(méi)問(wèn)題，豆類(lèi)和苜蓿種子一般兩三次，但一定先要液氮處理過(guò)。
嘉賓：是的，種子和我之前說(shuō)的水稻莖這種一定要液氮過(guò)才能出研磨效果。
用戶：這就是擬南芥。
用戶供圖
嘉賓：謝謝史老師，擬南芥植物中的果蠅。對(duì)于難研磨的樣品，我們有時(shí)也會(huì)采用之前說(shuō)的大鋼珠配小鋼珠的研磨方法，大鋼珠可以把大塊打成小塊，小鋼珠再通過(guò)不停的撞擊把樣品研細(xì)。
用戶：屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，具有代表性或者把復(fù)雜物質(zhì)簡(jiǎn)單化。樣品的提取效率怎么樣？
嘉賓：樣品的提取效率是有保證的，之前也有過(guò)案例分享是和手研磨的進(jìn)行比對(duì)，效果是比較突出的，一般老師提取之后會(huì)跑一個(gè)電泳，看膠圖的效果，之后在進(jìn)行具體的檢測(cè)和下一步工作。上次分享的案例是做藥物代謝分析的，結(jié)果也是讓老師滿意的。
嘉賓：樣品的自動(dòng)研磨效果確實(shí)對(duì)后續(xù)提取核酸、蛋白，酶，以及其他成分分析類(lèi)實(shí)驗(yàn)是很有幫助的
用戶：嗯，非常好。
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