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干貨分享：小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物
點(diǎn)擊：17425 添加時間：2016-12-26 10:15:00 信息來源：DHS
干貨分享：小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物
近期的組織研磨和樣品處理分享、討論，我們邀請到了實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所袁老師給大家分享，內(nèi)容是——小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物，研磨使用的儀器是鼎昊源TL2020組織研磨儀。
那接下來，就讓我們先睹為快，看看這個案例的情況。
實(shí)例1：加裂解液直接勻漿（使用Trizol提取組織RNA）
1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊；
2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆（一次性使用）；
3、先加入Trizol（不建議加入太多 Trizol，液體體積過大影響勻漿效果），蓋好管蓋，裝入鼎昊源TL2020組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)。
4、組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時間為2~5min（不同組織研磨時間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高，研磨前建議先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）；
5、再加入適量Trizol至總體積；
6、后面步驟按Trizol說明進(jìn)行。
實(shí)例2：先勻漿，再取一定量液體加裂解液進(jìn)行核酸抽提，本protocol適用提取小鼠組織中的病毒的核酸
1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊，樣品量較多時使用大離心管；
2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆，使用大離心管時，可以將氧化鋯珠數(shù)量增加；
3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水，總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好，蓋好管蓋，裝入鼎昊源TL2020組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)（研磨前建議先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）。
4、TL2020組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時間為1~5min（不同組織研磨時間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高），若研磨不充分，可以繼續(xù)研磨到充分為止；
5、一定溫度、轉(zhuǎn)速，離心數(shù)分鐘；
6、取上清液按照試劑盒說明書進(jìn)行后續(xù)提取步驟。
實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過一齊加1ml的Trizol，可能是體積過大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。
嘉賓：實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過一齊加1ml的Trizol，可能是體積過大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。
昊諾斯嘉賓：如果前面勻漿充分了，后面補(bǔ)齊裂解后不需要再研磨的，只需稍微混勻就可以。
用戶：可以選擇干磨嗎？就組織直接扔進(jìn)去弄成勻漿或者粉末，我再根據(jù)需要加trizol或者蛋白裂解液
嘉賓：跟大家分享下，我們最近用組織研磨儀用于抗原加佐劑的乳化，效果還不錯。一機(jī)兩用。
嘉賓：組織干磨效果不好，需要加入適量的液體，沒有液體很多組織掛在壁上。
用戶：提取下的核酸用途是什么？這個是我最關(guān)心的。
嘉賓：我們用于病原微生物檢測。
用戶：怎么個檢測法您能給我簡單介紹一下嗎？
嘉賓：所以我們用的最多的是實(shí)驗(yàn)2，先勻漿，破碎組織，釋放組織細(xì)胞中的病毒。
嘉賓：主要采用PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測。
用戶：嗯，PCR，我知道了，謝謝。
嘉賓：不客氣。一般的組織核酸抽提試劑盒中，都會有一部勻漿的步驟。
嘉賓：以前沒有研磨儀的時候都是用研缽手工勻漿，一天幾十上百個樣品，累成狗。
用戶：研磨如果用液氮處理，里面的液體不會凍住嗎？
用戶：我也有這個疑問，看來這個儀器是核酸分析必須的。
嘉賓：開始會凍住，等研磨到一定時間就自然解凍了，我們處理時只是讓它預(yù)冷一下，最好不要凍住。所以一般是放在-80度冰箱稍預(yù)冷一下就可以了
用戶：嗯！
用戶：謝謝
嘉賓：是的，核酸檢測必備。
用戶：早些天我看一個打沙棘的視頻，凍掉以后，直接就打下來了，所以冷凍還是有效果的，原理是一樣的。
嘉賓：還要講一下，選質(zhì)量好的EP管，現(xiàn)在一些國產(chǎn)的EP管質(zhì)量太差，蓋不嚴(yán)，導(dǎo)致液體漏出。如果預(yù)冷的話，一些EP管就可能被打碎了，我們有過這樣的例子。
用戶：我們也因?yàn)橘|(zhì)量不好的EP管影響過實(shí)驗(yàn)，所以試劑耗材也很重要。
嘉賓：同意。
用戶：一定要選擇質(zhì)量有保證的產(chǎn)品。
嘉賓：是啊。關(guān)于振動頻率說明一下，我們選的頻率比較高，我看到有的資料上講一般動物樣品如大腦、心臟、肺、胃、肝臟等無骨骼組織的研磨推薦頻率是1000-1100r/min研磨時間是1-2min，具體的頻率可根據(jù)樣品材料及數(shù)量的不同，做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。過大的頻率或者時間都可能會導(dǎo)致部分DNA的斷裂，建議每次研磨時間在1mm左右，中間停頓一會，重復(fù)2-3次。
用戶：謝謝袁老師。
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