1. 時(shí)間:2017-12-11
2. 樣品:人體臍帶組織
3. 儀器:主機(jī) TL2010S中通量組織研磨儀(鼎昊源科技)
配件 2ml研磨管,12×2ml適配器(1對(duì)),直徑5mm不銹鋼研磨珠
4. 步驟:
① 將臍帶組織分成等量的小塊,分別裝入2ml研磨管中;
② 在研磨管中分別加入2顆直徑5mm的不銹鋼研磨珠;
③ 在研磨管中分別加入300μm裂解液,蓋緊管蓋,置入2ml適配器中,將適配器固定在TL2010S研磨儀的搖臂上;
④ 在TL2010S操作面板上設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù):
Speed(振蕩速度):2000次/分鐘
Cycle(循環(huán)次數(shù)):1次
RunTime(研磨時(shí)間):50s
啟動(dòng)研磨儀,一鍵自動(dòng)研磨;
⑤ 研磨完全停止后,卸下適配器,取出研磨管,臍帶組織已研磨成細(xì)膩的勻漿狀;
⑥ 離心之后取上清液提取DNA,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

研磨總結(jié):
針對(duì)于臍帶、胎盤等韌性較大的動(dòng)物組織,在摸索實(shí)驗(yàn)條件時(shí),可以參照以下參數(shù):
1. 研磨時(shí)加入適量溶液(裂解液或緩沖液);
2. 選用直徑5mm或6mm的研磨珠,2ml的研磨管中加入2顆;
3. 轉(zhuǎn)速1800-2000次/分鐘;
4. 研磨時(shí)間30s-60s,設(shè)定梯度時(shí)間,找出合適的研磨時(shí)間。
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